Reprogrammation de cellules et édition de gènes

Services offerts et clientèles

Mise en place grâce au support de la Fondation Charles-Bruneau, la Plateforme de reprogrammation de cellules et d'édition de gènes offre un soutien technologique et scientifique hautement spécialisé à la communauté de recherche du CHU Sainte-Justine et d’autres établissements, ainsi qu'à des collaborateurs et clients externes qui voudraient utiliser les méthodes de reprogrammation et de modification du génome dans leurs projets de recherche. 

Édition de gènes

• Design et insertion de 3 gRNAs dans un vecteur d’expression lentiviral (i.e. lentiGuide-Puro)
• Séquençage
• Production de particules virales
• Mismatch assay (type Surveyor) 
  À noter que nous ne pouvons pas garantir une efficacité de clivage puisque cette dernière est dépendante de l’efficacité de transfection/transduction de la lignée cellulaire d’intérêt.
• Tri cellulaire si le phénotype le permet ou isolation clonale si nécessaire
• Clonage d’ARN guide (gARN), knock-out (KO), knock-in (KI), mutation ponctuelle (SNP)

Reprogrammation

• Reprogrammation de cellules somatiques (fibroblastes ou cellules de sang périphérique) ou lignées immortalisées en cellules souches pluripotentes induites (iPSC)
• Génération de 2 clones iPSC par lignée
• Caractérisation par immunofluorescence pour les marqueurs de pluripotence SSEA4, Tra1-60 et Sox2- OCT4
• Formation de tératomes chez les modèles précliniques immunodéficients NSG
• Différenciation des iPSC en différents types cellulaires incluant les cellules neurales, endothéliales, hépatiques fibroblastes et myoblastes

Équipement

• Cas9, Cas9D10A, Cpf1, ZFN (non exhaustif)
• Kit de reprogrammation CytoTune™-iPS 2.0 Sendai (Life Technologies)
• Plasmides de reprogrammation
• Lignées contrôles d’iPSC issues de fibroblastes ou de cellules de sang périphérique
• Différents anticorps pour détecter les principaux marqueurs de pluripotence ainsi que certains marqueurs spécifiques de différenciation

Formation

Au besoin, une formation de base d’une durée d’environ 2 heures sur la culture des cellules iPSC (passage et expansion, congélation et décongélation) est offerte gratuitement aux utilisateurs de la plateforme. Pour prendre rendez-vous, contacter un gestionnaire.

Contacts

Christian Beauséjour, PhD
Directeur de la plateforme
c.beausejour@umontreal.ca

Partenaires financiers

• Fondation Charles-Bruneau
• Le Canadien Pacifique
• Réseau de thérapie cellulaire, tissulaire et génique du Québec